Quantiferon TB Gold Training Video
El cuantificador en Typical Plus SI es una
prueba de diagnóstico in vitro que se utiliza para
identificar respuestas in vitro a
antígenos peptídicos, como AT6 y CFB10,
asociados a la
infección por Mycobacterium tuberculosis. Estas proteínas
están ausentes en todas las histonas PC y en la
mayoría de las micobacterias no tuberculosas. Los
individuos infectados con MTB tienen
linfocitos en la sangre que reconocen
estos antígenos, lo que resulta en la secreción de
la citocina interferón gamma. La
detección y medición del interferón
gamma mediante un
ensayo inmunoenzimático (ELISA) constituye la base de
esta prueba. El cuantificador en TB Gold Plus
utiliza tubos de recolección de sangre especializados
recubiertos con un cóctel de péptidos que
simula las proteínas AT6 + CFB10. Los
tubos de recolección de sangre incluyen un tubo nulo, un tubo TB1, un tubo
TB2 y un tubo mitogénico para cada
participante del estudio. La sangre se recolecta directamente
en los tubos de recolección del cuantificador
o en tubos que contienen
heparina de litio y luego se transfiere al
cuantificador en plástico. Después de que cada
tubo de recolección se ha llenado con un
mililitro de solución, los tubos se mezclan
para asegurar que la superficie interna esté recubierta
de sangre y así garantizar que los antígenos en
los túbulos se disuelvan. El
fabricante recomienda que los
tubos de recolección de sangre se incuben en posición
vertical dentro de las 16 horas posteriores a la recolección
a
siete grados Celsius durante 16 a 24 horas;
sin embargo, en Sattva incubamos los
tubos de recolección de sangre dentro de las dos horas posteriores a la
recolección a 37 grados Celsius durante un
período de 16 a 20 horas. Después de la
incubación, centrifugamos el plasma durante 15
minutos a 2000 a 3000 RC. El plasma se puede
usar directamente del
tubo de recolección para el procedimiento de Eliezer o se puede
extraer y almacenar a 2 a 8 grados durante un máximo de
28 días, después de lo cual debe
congelarse por debajo de -20 grados Celsius. El
análisis se realiza utilizando el
plasma recolectado. La densidad óptica de
OD se lee utilizando un espectrofotómetro. El
software de análisis Quantify on + utiliza los
datos brutos o ODS y calcula los resultados.
El software genera una curva estándar
como una evaluación del ensayo y
proporciona un resultado de prueba para cada sujeto.
Visite el sitio web de Quantifier on en
wwlp.com para ver una demostración en video de
cómo recolectar sangre en los
tubos de recolección de sangre especializados de Quantifier on. Después de la extracción de sangre,
invierta los tubos 10 veces firmemente para
asegurar que toda la superficie del tubo esté cubierta de
sangre para disolver los antígenos en
los túbulos. Incube los tubos a 37
grados durante 16 a 20 horas. Después de la
incubación, centrifugue los tubos a 2000
a 3000 RCF durante 15 minutos.
[Música]
El kit Eliezer consta de dos placas de 96 pocillos,
un vial de
estándar gamma interferente liofilizado, un vial de conjugado La Falaise,
diluyente verde, tampón de lavado concentrado 20 veces,
solución de sustrato enzimático y solución de parada enzimática.
Antes de comenzar el Eliezer, todos los
reactivos del kit deben estar a temperatura ambiente.
El kit se retira del refrigerador una
hora antes del inicio del ensayo. El
conjugado debe mantenerse en el refrigerador y
Julius reconstituir el estándar y los
conjugados usando agua desionizada o destilada
con el volumen indicado en el
vial. Devuelva el conjugado al refrigerador.
Deje que el estándar se equilibre con
los otros agentes a temperatura ambiente. El
procedimiento Eliezer tiene los siguientes pasos:
preparación de la concentración de trabajo.
Serie de dilución de conjugado y curva estándar:
agregar 50 microlitros del
conjugado de concentración de trabajo a los pocillos,
agregar 50 microlitros de plasma a las
paredes, agregar 50 microlitros de
estándar gamma interferente a las paredes,
incubar la placa a
temperatura ambiente durante 120 minutos, lavar la
placa al menos ocho veces con un
tampón de lavado prepagado después de la incubación,
agregar 100 microlitros de solución de sustrato enzimático
a la placa, incubar la placa
durante 30 minutos a temperatura ambiente
y finalmente agregar 50 microlitros de
solución de parada a la placa.
Se utiliza un espectrofotómetro para medir la
concentración
[Música].
Preparar los conjugados de concentración de trabajo
diluyendo la cantidad requerida de
conjugado concentrado 100 veces reconstituido en diluyentes verdes. La tabla 1
resume el volumen de conjugado y
diluyente verde necesario para la cantidad de
tiras requeridas para completar la corrida.
Devolver cualquier concentrado 100 veces de Kongregate no utilizado
a 2 a 8 grados de Jeeves
[Música]
[Música]
para preparar el estándar. Etiqueta de la serie de dilución
para los tubos 1, 2, 3 y 4. Agregue 150
microlitros de diluyente verde al tubo 1.
[Música]
Agregue doscientos diez microlitros de
Greendale en los tubos dos, tres y
cuatro. Agregue 150 microlitros de
interferón gamma reconstituido estándar al tubo uno
y mezcle bien.
[Música] [
Música]
[Música]
Tome setenta microlitros de la
solución estándar prepagada del tubo uno y
transfiéralos al tubo dos, asegurándose de mezclar
bien.
[Música]
Tome setenta microlitros de la
solución estándar del tubo dos y transfiéralos al
tubo tres, asegurándose de mezclar bien. El tubo cuatro
sirve como estándar 0 que contiene
solo diluyente verde.
[Música]
Agregue 50 microlitros de la
concentración de trabajo a cada uno.
[Música]
[Música]
[Música]
Agregue 50 microlitros del plasma de prueba a
los pocillos asignados en la placa.
[Música]
[Música]
[Música]
Agregue 50 microlitros de estándar a los pocillos
asignados a los estándares.
[Música]
[Música]
Cubra la placa con una tapa y mezcle en
el agitador de placas durante un minuto a una
forma de onda veinte y una amplitud seis, teniendo
cuidado de evitar salpicaduras. Incube la
placa a temperatura ambiente durante
ciento veinte minutos. La placa
no debe exponerse a la luz solar directa
durante la incubación. Mientras incuba,
prepare el tampón de lavado de fuerza de trabajo
agregando 15 mililitros de
tampón de lavado concentrado 20 veces a novecientos
cincuenta mililitros de agua desionizada o
destilada y mezcle suavemente. [
Música] [Música
] [
Música]
[Música]
Después de la incubación, lave las placas con
el tampón de lavado preparado al menos ocho
veces, asegurándose de llenar cada pocillo con
el tampón de lavado para cada lavado y
dejándolo remojar durante cinco segundos antes
del siguiente.
[Música] [
Música]
[Música]
Golpee las placas boca abajo sobre una
toalla absorbente para eliminar cualquier líquido residual
antes de proceder con el siguiente paso. Agregue
100 microlitros de la solución enzima-sustrato
a cada pocillo. [Música]
[Música]
[Música]
[Música]
[Música]
Cubra la placa con la tapa y mezcle en
el agitador de placas usando la misma configuración
que se usó para la primera agitación. Incube la
placa a temperatura ambiente durante 30 minutos.
La placa no debe exponerse a la
luz solar directa durante la incubación. Durante esta
incubación, inicie en el
espectrofotómetro y abra el
software del instrumento. Seleccione la siguiente
configuración: el número de pasos a leer.
Seleccione las longitudes de onda de 450 nanómetros
y 650 nanómetros y seleccione que se muestren
los valores restados. Agregue 50
microlitros de la solución de parada a cada
pocillo y mezcle brevemente en el agitador de placas.
[Música]
[Música] [Música]
Retire la tapa de la placa y coloque la placa
en el espectrofotómetro. Lea los valores de
Odie. Copie los valores de Odie de la placa en un nuevo
documento de Excel y guárdelo. Abra el
cuantificador en el software TV plus. Ingrese la
fecha, el número de ejecución, el número de lote y el
nombre del operador.
[Música]
Seleccione el formato manual. Asigne los
estándares verticalmente a la
posición correspondiente en el diseño de la placa.
Seleccione las muestras del sujeto en el
primer ID de muestra y seleccione los
pocillos correspondientes en el diseño de la placa.
Repita este proceso hasta que todas las muestras
estén asignadas a sus posiciones
[Música]
[Música]
[Música]
copie los Odie del archivo de Excel
seleccione la pestaña pegar o datos esto
pegará los Odie en las
posiciones correspondientes seleccionadas en la placa seleccione
calcular la hoja de resultados se
mostrará en la pantalla seleccione la
pestaña imprimir para imprimir los resultados esto también se puede
guardar como un PDF para exportar resultados
cierre la ventana de impresión y seleccione
exportar resultados luego seleccione cantidad en +
y tipo de exportación seleccione exportar al
portapapeles coloque los resultados en
la hoja de cálculo de Excel que contiene los
Audis
[Música]
todos los resultados deben ser revisados por un
supervisor antes de su liberación consulte
el prospecto y el SOP proporcionados
para obtener más información sobre la
interpretación de los resultados limitaciones del
procedimiento y solución de problemas para
cualquier cuantificador sobre consultas relacionadas envíe un
correo electrónico a nuestro gerente de laboratorio Dr. Nicole
Pelle, nuestro control de calidad del señor
Yolanda Clotty o nuestro
tecnólogo senior como Motoki en la dirección de correo electrónico
se muestra en la pantalla
[Música]
usted
[Música]
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